真核基因轉(zhuǎn)染實驗

一、服務(wù)介紹

細胞轉(zhuǎn)染是指將外源分子如DNA，RNA等導入真核細胞的技術(shù)。目前，將外源物質(zhì)導入細胞的方法主要分為三大類：1、脂質(zhì)體（或是脂質(zhì)體替代物）轉(zhuǎn)染；2、電轉(zhuǎn)；3、病毒感染。轉(zhuǎn)染技術(shù)又可分為瞬時轉(zhuǎn)染和穩(wěn)定轉(zhuǎn)染。

基因的功能研究可分為loss-of-function和gain-of-function，即通過過表達該基因和抑制內(nèi)源基因的表達的手段來研究某個基因的生物學功能。常規(guī)轉(zhuǎn)染技術(shù)可分為兩大類，一類是瞬時轉(zhuǎn)染，一類是穩(wěn)定轉(zhuǎn)染（轉(zhuǎn)染）。

真核基因轉(zhuǎn)染實驗 瞬時轉(zhuǎn)染

服務(wù)介紹

通過脂質(zhì)體介導轉(zhuǎn)染法基因轉(zhuǎn)染技術(shù)，將靶基因?qū)爰毎?，一般在轉(zhuǎn)染后48小時左右，靶基因即可在細胞內(nèi)表達。根據(jù)不同的實驗目的，48小時后即可進行靶基因表達的檢測等實驗。觀察目的基因及其表達蛋白在某種細胞中的功能（短時間即可進行觀察，但效應會很快丟失）

服務(wù)流程

1、接收質(zhì)粒、細胞

2、細胞培養(yǎng)

3、轉(zhuǎn)染

4、拍照

5、效率鑒定

客戶提供：

1、構(gòu)建好的外源基因載體，或由本公司進行載體構(gòu)建（需提供目的基因名稱、種屬、序列或Gene Accession Number）。

2、待轉(zhuǎn)染的細胞系（1×10⁶個細胞，可傳代，倍增時間小于48小時）以及細胞培養(yǎng)條件的說明。

3、若需要檢測靶基因的表達，需提供相應抗體或由公司代購。

交付內(nèi)容

1、構(gòu)建好的瞬時轉(zhuǎn)染細胞。

2、實驗報告：詳細實驗步驟及相關(guān)的外源基因表達分析。

穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細胞株的構(gòu)建

服務(wù)介紹

穩(wěn)定轉(zhuǎn)染，就是轉(zhuǎn)染的質(zhì)粒DNA整合到宿主細胞染色體上，使宿主細胞可長期表達目的基因及蛋白。需要在瞬時轉(zhuǎn)染基礎(chǔ)上對靶細胞進行篩選或者應用高轉(zhuǎn)染效率的病毒，根據(jù)不同基因載體中所含有的抗性標志選用相應的藥物進行細胞傳代，從而得到可穩(wěn)定表達目的基因的細胞系。

服務(wù)流程

1、接收質(zhì)粒、細胞

2、細胞培養(yǎng)

3、轉(zhuǎn)染

4、抗生素篩選

5、得到單克隆細胞株

6、擴增

7、檢測

客戶提供

1、構(gòu)建好的外源基因載體，或選擇由公司構(gòu)建（價格參考載體構(gòu)建）。

2、待轉(zhuǎn)染的細胞系（1×106個細胞，可傳代，倍增時間小于48小時）以及細胞培養(yǎng)條件的說明。

3、提供相應抗體

交付內(nèi)容

1、構(gòu)建好的穩(wěn)定表達細胞系。

2、實驗報告：詳細步驟、相關(guān)的外源基因表達分析等。

二、服務(wù)列表

項目
 備注
 周期
 
瞬時轉(zhuǎn)染+鑒定
 鑒定方法為western blot
 10個工作日
 
穩(wěn)定轉(zhuǎn)染+鑒定
 鑒定方法為western blot
 45個工作日(貼壁細胞)